Sedan 1880-talet , är fortfarande den gramfärgning testet en viktig metod för bakteriell identifiering och klassificering . Mikrobiologer utför ofta Gram testet som ett första steg i att identifiera speciella typer av stavformade bakterier från släktet Bacillus . Gramfärgning är uppkallad efter sin uppfinnare , danske bakteriologen Hans Christian Gram . Tekniken fungerar på grund av en skillnad i grampositiva och gramnegativa bakteriella cellväggen fysiologi. Vissa grampositiva stavar orsaka allvarliga sjukdomar som mjältbrand och tetanus.Things Du behöver
Lab kläder
Handskar
skoskydd
Tryckkokare
Bakterier koloni
Agar
Petri rätter
Water
Ympning slinga
glasskiva
Metanol
bunsenbrännare
Crystal violett fläck
Jod fläck reagens
Decolorizer
Safranin
Fuchsin lösning
Absorberande papper
Mikroskop
Visa fler instruktioner
en
Säkra användningen av en ren, aseptisk laboratorieutrymme för att genomföra den Gramfärgning testet. Bär rena lab kläder och skoskydd för att förhindra kontaminering . Använd handskar och en mask vid hantering av bakteriekulturer . Isolera en koloni av baciller för test och växer ut på näringsrik agar i petriskålar . Sterilisera petriskålar och agar med en tryckkokare innan du använder .
2
Tillsätt några droppar av rent vatten till odlingsskålen . Fördela den jämnt över agar . Dra en ympning slinga lätt över agar yta . För över provet på en ren glasskiva och smeta det jämnt i cirkulär område stort som en krona . Håll storleken av provet minimal ; du bör vara knappt kan se den med blotta ögat . Addera 3
Applicera 95 procent metanol över glid smear i två minuter för att fixera cellerna och förhindra snedvridning av deras morfologi . Lufttorka objektglaset eller värm försiktigt över en låg bunsenbrännarens låga . Flytta skjut back – och-tillbaka för att värma jämnt och undvika lokala hotspots . Applicera värme likformigt och konsekvent. Undvik att ta bilden ur lågan tills du är klar att värma den.
4
Häll kristallviolett fläck reagens över den fasta bilden. Låt den stå i 30 till 60 sekunder . Tvätta fläcken med kranvatten under några sekunder . Tappa överflödigt vatten från bilden . Täck bilden med jod fläck reagens för 30 till 60 sekunder . Tvätta av jod med kranvatten . Luta slide och tillsätt några droppar Decolorizer . Använd den tills avrinning är ren . Tvätta objektglaset .
5
Blötlägg bilden med rosa -färgade safranin kontrafärgningsreagensi 30 sekunder . Du kan ersätta grundläggande fuchsin lösning för safranin . Tvätta försiktigt glida och skaka av överflödigt vatten . Blot den torr med hushållspapper och sedan lufttorka bilden. Undersök ställdes sliden under ett mikroskop utrustat med en ljuskälla. Leta efter och identifiera grampositiva bakterier stavar med blå eller violett färg från gramfärgning testet . Addera