Western blot , en analytisk teknik som används för att peka ut ett specifikt protein i ett givet prov , sysselsätter möjligheten av ett enzym eller fluorescensmärktaprimära antikroppen att binda till sitt specifika antigen . Det är ett tre – stegsförfarande som börjar med gelelektrofores , följt av membran blotting och sondering med antikroppar. Protein detektering kan vara direkt eller indirekt , med den senare med användning av en märkt sekundär antikropp som är riktad mot den primära . Även accepterad som en rutinproteinanalysteknikhar western blot begränsningar och fördelar . Fördel : Känslighet
En av de största argumenten för western blot är dess känslighet. På grund av dess förmåga att upptäcka så lite som 0,1 nanogram protein i ett prov , kan tekniken teoretiskt fungera som ett effektivt tidigt diagnostiskt verktyg , avkänning minsta lilla immunogena svar från ett virus eller bakterier i ett patientprov . En indirekt western blöt ytterligare bygger på denna känslighet från den sekundära antikroppen förmåga att amplifiera intensiteten hos den signal som detekteras av avbildningssystemet . Ökad känslighet innebär att färre antikroppar behövs för att testa, vilket skär ned laboratoriekostnader avsevärt
Fördel : . Specificitet
western blot-teknik har sitt specificitet till två stora bidragande faktorer. Först sorterar gelelektrofores ett prov i proteiner av olika storlek , laddning , och konformation. Processen i sig är ett stort steg mot upptäckt , som band bildas i gelén ger redan ledtrådar om storleken på protein eller polypeptid av intresse. Specificiteten hos interaktionen antikropp-antigen tjänar såsom den andra stor faktor . Eftersom specifika antikroppar affinitet till specifika proteiner , kan processen detekterar ett målprotein även i en blandning av 300.000 olika proteiner Addera Nackdel : . Prone till False eller Subjektiva Resultat