i en immunbindningskapaciteteni en behållare eller i brunnarna är högre än mängden protein placeras i behållaren eller brunnar. För att minska eller förhindra antikroppar eller andra typer av proteiner och molekyler från att absorbera till behållare eller brunnar , måste analysen tvättas med en lämplig buffert och en specifik blockerande reagens måste tillsättas. Den typ av buffert och den blockerande reagenset väljs beror på typen av experimentella assay.Things du behöver
plattbrunnar
Buffertlösning
blockeringsreagens
Pipett
Antigen
Antikropp
Visa MoreInstructions
1
Coat plattan brunnarna med antigenet . Använd en antigenutspädning . Rena lösningar av antigenet är inte nödvändiga , eftersom endast cirka 3 procent av proteinet i provet är målproteinet . Vid utspädning , se till att proven innehåller antigenet i en koncentration som ligger inom detektionsområdet av antikroppen . Pipetantigenspädlösningenner brunnar . Vissa kan plattorna förbelagda med antigen. Läs instruktionerna som medföljer plattbrunnarna.
2
Täck plattorna med en självhäftande plast och inkubera över natten . Tvätta plattorna med buffertlösningar , såsom Tris-buffrad koksaltlösning eller fosfatbuffrad koksaltlösning . För att tvätta, skölja plattorna med användning av en klämflaska fylld med buffertlösningen över ett laboratorium handfat. Pat plattorna med en pappershandduk för att avlägsna eventuella kvarvarande droppar av buffertlösning . Tj 3
Minska icke – specifik bindning av proteiner och molekyler med hjälp av en blockerande buffert eller reagens , såsom ett rengöringsmedel blockerare, torrmjölk eller bovinserum. Den typ av blockerande reagens som används kommer att bero på den analysen. Lägg blockeringsreagens till brunnarna med användning av en pipett. Täck plattan igen med självhäftande plast och inkubera över natten .
4
Åter tvätta plattan brunnarna igen med en buffertlösning . Dessa steg kommer att minska mängden av icke-specifik bindning som kan uppträda på de plattbrunnar före tillsats av den nödvändiga antikroppslösningen för förfarandet. Dessutom kan de blockerande reagenser bidra till att minska bakgrundsfärger i resultaten av analyserna . Addera