replikering av kromosomer , budbärar-RNA bearbetning , översättning av proteiner , och avgörande beslut i ett tidigt utvecklingsskede är beroende av samspelet mellan DNA , RNA och proteiner . Dessa interaktioner är de grundläggande biologiska processer för genexpression och proteinsyntes. Forskare använder ofta Saccharomyces cerevisiae , av samma art av jäst som används i bakning och bryggning , för att studera gener som kodar för specifika proteiner och analysera interaktioner mellan proteiner och andra molekyler . Jästen tre -hybridsystemet är ett av tre varianter av jäst två -hybridsystemet som används för att studera dessa växelverkningar. Den två-hybridsystemet
två – hybridmetod används för att detektera protein-proteininteraktioner genom att leta efter uttrycket av en reportergen. Många proteiner har minst två domäner eller diskreta strukturella och funktionella enheter. GAL4 , ett protein som finns i Saccharomyces cerevisiae , har en DNA- bindande domän ( DBD ) och en aktiveringsdomän( AD ) . I denna metod är en hybridprotein smält till DBD och en andra till AD . Ingen rapportörgenen uttrycks genom fusion av endast en av de hybrider. Eftersom GAL4 reportergenen uttrycks endast när båda hybrider är närvarande , är protein – proteininteraktionanges.
Tre – Hybrid System
tre – hybrid metod identifierar en reportergen för att detektera interaktionen av proteinet med RNA. Den första hybridprotein består av en DBD smält direkt till en RNA- bindande domän . Den andra består av AD hos GAL4- transkriptionsfaktor länkad till ett RNA -bindande protein . Det RNA-bindande domäner interagerar med en hybridmolekyl av RNA som binder de två hybridproteiner för att bilda ett komplex. Bildning av komplexet utlöser expression av GAL4 reportergen. Eftersom rapportgenen är igång genom bildandet av tre – hybridkomplex, indikerar närvaron samspelet mellan RNA och protein . Addera The One – Hybrid System
en – hybridmetod används för att detektera interaktionen av proteinet med DNA. En en – hybridsystem säkringar ett enda protein , som förbinder AD direkt till DBD . Istället för att identifiera en reportergen , ser denna metod för ett specifikt protein, som måste känna igen en mål- DNA-sekvens . Närvaron av det specifika proteinet visar interaktionen av protein med DNA .
One – Two Hybrid System
ett-två -hybrid metod används för att studera protein – protein och protein-DNA- interaktioner samtidigt. Använda nyutvecklade jäststammar , utnyttjar denna metod GAL4 reportergen för att identifiera protein-protein- interaktioner och ett p53- konsensus att identifiera protein-DNA- interaktion. Metoden förväntas avsevärt öka precisionen av experimentella resultat genom att minska förekomsten av falska positiva som erhållits i andra hybridsystem . Addera